培养条件：细胞培养所需的气相环境为95%空气和5%二氧化碳，最佳温度设置为37℃。在传代方法方面，首次传代建议采用1:2的比例进行。传代后，每两天进行一次更换培养液的操作。

请注意，建议同时购买【尊龙凯时】的配套培养产品，以享受更多优惠。在收到细胞后，无需立即打开瓶盖，请首先确认培养瓶上的细胞名称与您所订购的是否一致，同时检查瓶身有无损坏或漏液的情况。如未发现异常，使用显微镜观察细胞生长情况，并进行不同倍数的拍照记录（确保40x、100x和200x倍各一张），这将作为重要的售后依据。若未提供照片，系统将默认细胞状态良好。

贴壁细胞的传代步骤如下：第一步，弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS对细胞进行1-2次冲洗。第二步，添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃的培养箱中消化1-2分钟，观察细胞的消化情况，当大部分细胞变圆并开始脱落时，迅速取回操作台，轻敲培养瓶并添加5ml以上的完全培养基以终止消化。第三步，轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，并添加1-2ml的完全培养基重悬细胞。第四步，将细胞悬液按1:2的比例分至两个T25瓶中，补充新鲜的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培育。

悬浮细胞的传代步骤如下：首先，采用半换液法处理，将培养瓶竖直放置于培养箱中静置1小时，轻轻吸走约3ml培养基，然后补充3ml的完全培养基。如果培养基变色较慢，可直接添加500μl的FBS。在传代时也可直接补给5ml的培养基，分为两个培养瓶进行，通常每传代3次左右需进行一次离心传代，以去除死细胞。

对于细胞的冻存，步骤如下：首先，当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；接着，添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察待细胞回缩变圆后加入5ml的完全培养基来终止消化，轻轻吹打使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。弃去上清后，沉淀细胞并添加1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。最后，将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱中，如果后续需要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放至少24小时。

细胞复苏步骤为：从液氮中取出冻存管（注意戴好防护设备），迅速将其置入37℃水浴中解冻，直至管内无结晶，然后用75%的酒精擦拭管外。接着，将冻存管内细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟；弃去上清，重悬于5ml的完全培养基中，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。第二天，换用新鲜的完全培养基继续培养。

注意事项：在运输过程中，部分细胞可能因贴壁不牢而脱落，这属于正常现象。如果脱离的细胞较多，可将培养瓶内的培养液收集至离心管，进行1000RPM的离心，5分钟后收集上清用于过渡培养，处理后的沉淀再加入1-2ml胰酶轻轻吹打，重悬后消化1-2分钟，并使用5ml的完全培养基终止反应。再次离心后，弃去上清，添加1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2培养箱中进行培养。

如细胞出现问题，可重发的情况包括：1）运输过程中遭遇问题，如细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等；2）细胞污染，请在收到产品48小时内提供真实的实验结果，核实后重发；3）常温发货的细胞在静置24小时后或者干冰冻存的细胞在复苏后24小时，绝大多数细胞未存活（须提供真实清晰的细胞状态照片），可重发；4）干冰运输后复苏24小时内未开封的细胞出现污染；5）细胞活性问题，请在7天内提供真实实验结果，含台盼蓝染色法的细胞活力检测，核实后予以重发；6）收到细胞当日及次日、第三天请拍照，如三天内未告知，视为产品合格；7）如果在4-7天内出现问题，需提供前3天的照片以及详细操作步骤，技术人员将依据情况做出判定，若责任在我们，将重发。

不予重发的细胞问题情况包括：1）客户导致的细胞污染；2）因客户不当操作导致细胞状态差；3）若使用非本库推荐的细胞培养体系，导致细胞状态不佳；4）细胞状态不良，未提供培养前3天的照片；5）细胞在培养过程中有其它处理；6）收到细胞后2天内未告知问题；7）依据具体情况而定。